Вихідною речовиною для отримання вітаміну Д3 синтетичним шляхом може бути 3, 5-динітробензоату. Зустрічається та виділяється холекальциферол з риб’ячого жиру в печінці. Він також проводиться шляхом ультрафіолетового опромінення 7-дегідрохолестерину, отриманого з холестерину, і потім очищується кристалізацією.